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        SARS-CoV-2 假病毒

        SARS-CoV-2 假病


        假病毒描述:

        SARS-CoV-2假病毒以HIV病毒為骨架,外面包被SARS-Cov-2Spike 蛋白,能夠感染過表達人ACE2的細胞??捎糜跍y試研究阻斷病毒侵入的中和抗體或其它藥物。假病毒只能單次感染,不能復制,安全性高,可在P2級實驗室使用。

         

        假病毒參數:

        產品名稱

        SARS-CoV-2 假病毒

        貨號

        VS-SC-0001

        熒光基團

        eGFPLuciferase

        生物安全防護措施

        P2級實驗室

        包裝

        100~200ul

        感染滴度

        2×105 TU*(基于hACE2-COS7細胞)

        拷貝數

        108

        保存

        -80

        * TUtransfection unit),1TU=使1個細胞發出綠色熒光。

         

        假病毒制備:

        維通達將Spike蛋白表達質粒、包裝質粒、轉移質粒共轉染到293T細胞內,包裝出以SARS-CoV-2-Spike為表面衣殼蛋白的假病毒。假病毒同時帶有Firefly LuceGFP標記,可以通過有Firefly LuceGFP檢測感染。示意圖如下:

        d14abe195395274291be8f9ebc14c8e6-sz_278476.png

        注意事項:

        1) 病毒使用PEG8000濃縮,會有血清蛋白沉淀,外觀渾濁,但不影響使用。

        2) 病毒干冰運輸,-80℃保存,使用前室溫融化。

         

        使用方法:

        1. 第一天,96孔板每孔接種5×103hACE2-COS7細胞。

        2. 第二天,除去培養板里的培養基,新鮮培養基(100ul/孔)與假病毒2×103 TUPolybrene混合(5ug/ml終濃度),加入培養孔,培養板離心(1200g x 2 Hour,4℃)。

        2×103 TU時,luciferase的亮度約為1×106)。

        3. 離心感染的細胞,吸干凈培養基,再用PBS洗一次;每孔加入30ul 0.25%的胰酶,37℃孵育5min,加入100ul完全培養基,繼續培養。

        4. 感染后繼續培養3天(每天換液),進行luc檢測,也可以觀察eGFP熒光(根據情況更換培養基)。



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